Level Control szintetikus Systems

Ezek párosítva a négy riboregulators a négy riporter gének, és szabályozott mindegyik két azonos promoterek. Így, hogy egy kapcsolóval on igényel indukáló két példányban ugyanazt a promoter: egy kapcsoló a Tarna, a másik pedig crRNA + riporter Nők Canada Goose Kensington Parka Kék Rendelés mRNS. Mivel számos szintetikus biológia projekt többször használja ugyanazt a pár promóterek újra és újra (plac jut eszébe!), Érdekes volt olvasni néhány promóterek én még soha nem hallottam korábban. Amellett, hogy a jól ismert pLux promoter, ők is használják pLlexO, egy DNS-károsodás promotert, amely úgy indukáltuk egy DNS-károsító kábítószer; pLfurO, vasaló promoter által kiváltott hozzáadásával vaskelátor; és pMgrB, amely akkor aktiválódik, alacsony Mg2 + körülmények között. Amikor ezt mind együtt kapták kapcsolótábla a várakozásoknak megfelelően működik, a riporter a termelés megfelelő indukciós feltételt (lásd az ábrát). Azonban LacZ nem volt túl magasan okozta. 3 óra elteltével az aktivitás 5-ször magasabb, mint a indukciós, összehasonlítva a 200-szoros a GFP és mCherry és 35-szeres a szentjánosbogár luciferáz. Plusz, a szórás igen nagy, és az egész csak három ismétlésben. Továbbá, a riboregulator csökkent aktivitású (mintegy 1/3 mások) volt párosítva GFP, és láthatóan nem akadályozza kifejezést.

építése Genetikai Telefonközpont

Ahhoz, hogy valóban módjuk készülék a teszt, úgy kiütötte négy kulcsfontosságú gének kontrolling E. coli a glükóz metabolizmusát, és átadta az irányítást felette, hogy a kapcsolótábla. E. coli égő glükóz, eltereli, hogy három különböző úton: EMP, EDP, és a PPP. A csapat négy olyan enzimeket, amelyek betöltik a kulcsfontosságú pontokat ezeket tápláló három utat. Azt lehet gondolni rá, mint egy vezeték, a négy enzim szelepek áramlásának szabályozására három kilépési pontok (lásd az ábrát). Először számszerűsített mRNS-szintje a négy 'szelep' géneket, majd mennyiségileg az enzimek aktivitása, és végül számszerűsített szintek fő anyagcsere termékek (a 'metabolomra') az egyes állam.

baktériumok (élesztő) mérhetetlenül önálló és hatékony szaporodását! és egyre nagyobb mértékben támaszkodnak rájuk, hogy az üzemanyag-termelésre és gyártása gyógyszerek. A mi jelenlegi technikai, mi nagyrészt mikrobák egyetlen hasznos gént, mint az inzulin. Egyre fogjuk használni kifinomultabb, többlépéses utak, mint ami helyeztek gyártani a gyógyszer artemisinin. Ahogy bonyolultság növeli még tovább, hogy szükség van a vezérlő is növeli. Ez könnyű optimalizálni feltételeket egyetlen gén gyártó, de mi a helyzet egy gyógyszer, amely előírja, több hőmérsékletet, vagy redox állapotok, vagy közepes összetétele? Az a képesség, hogy gyakorolja a magas szintű ellenőrzés genetikai áramkörök, sőt hatalmas ágak szervezet széles anyagcsere segít majd bevezetésében az új gyártási technológiák alapján a szintetikus biológia.

A tipikus szintetikus biológia projekt tervezése, építése, és tesztelje az új genetikai áramkör E. coli. Ez lehet egy új típusú biológiai érzékelő, egy útvonal szintetizálására egy gyógyszer, vagy akár egy kezdetleges számítógépet. A lehetőségek száma végtelen. Bár akkor talán kap egy tisztességes papír vagy bemutatása belőle, mindannyian tudjuk, hogy a szintetikus biológia felé mozdul gyakorlati ipari alkalmazások szükségünk lesz erősebb és kifinomultabb szintetikus élőlények. A létfontosságú része dolgozik magasabb rendű rendszereket, amelyek lehetővé teszik a magas szintű ellenőrzés, mint a számítógépes programok hívó alprogramok. Szükségem van a hiba, hogy váltani erjedő egy új gyógyszer? Villog a fény aktiválja fényérzékeny genetikai kapcsolók. Szeretne változtatni a színét a E. coli nightlight? Változás a redox potenciál.

Bioengineers a Boston University épült, amit hív genetikai switchboard1, ami egy nap lehetővé a magasabb rendű felett genetikai áramkörök alkalmazott gyakorlati alkalmazások. Régebben egy újabb technológia (által kifejlesztett ugyanaz labor) nevű riboregulators. Egy riboregulator két részből áll: az első, az úgynevezett cisz respressed mRNS (crRNA) van rögzítve egy közönséges mRNS-molekula. Amennyiben jelen van, a riboszóma kötőhely az ATG startkodon teszi hozzáférhetetlenné a riboszóma által egy hurok struktúrát. A második rész egy transz aktiváló RNS-t (Tarna), amely tartalmaz egy szekvenciát komplementer része a crRNA. Amikor a Tarna kötődik a crRNA, a crRNA hurok szerkezete megváltozott, és a riboszóma kötőhely hozzáférhetővé tenni a helytől. (Lásd az ábrát egy grafikus magyarázat, hogy ezek a riboregulators működik). Ezek eltérnek riboswitches, amelyek kötődnek a kis molekulák helyett nukleinsavak. Ők már két korábbi munka, és kapott még két módosításával egy meglévőt. Keverésével és a megfelelő valamennyi kombinációja a négy crRNAs a négy Tarnas megerősítették, hogy Tarnas nagyon jellemző a partner crRNA (gyakran 'ortogonális'), bár a leginkább mutáns riboregulator volt mintegy harmada a tevékenység, mint a többiek. Azok eszköztár most kész, összeállított egy kapcsolótábla négy leggyakrabban használt könnyen mérhető GFP, mCherry (egy változata RFP), LacZ, és szentjánosbogárluciferáz. GFP és mCherry vannak fluoreszcens fehérjék, amelyek által mért izgalmas a minta egy adott hullámhosszú fény, és mérjük a kibocsátott fényt egy másik hullámhosszon. LacZ hatására a sejtek kékre vált, ha a tenyésztés speciális közeg; szentjánosbogár luciferáz, az enzim között egy szentjánosbogár fénye, mérjük egy lumineszcencia vizsgálatban.

Amellett, hogy bizonyítja a koncepció, hogy tudjuk irányítani létfontosságú anyagcsere paraméterek, megközelítések, mint ez felfedi néhány alapvető biológia. A vad típusú E. coli csatorna 80% -a glükóz keresztül EMP, de a saját kísérletben megfigyelt hasonló növekedési ütem, ha összehasonlítjuk EMP, EDP, és a PPP (az összes alacsonyabb, mint a vad típusú sejtek, amelyek nem rendelkeznek az újabb terhet fenntartása plazmidok). Érdekes, hogy a kapcsolótábla nem volt képes eléri vagy meghaladja a vad típusú szintjét GND mRNS vagy GND enzim aktivitását, ami elterelje a metabolitok a PPP, bár a vad típusú sejtek nem nagyon kihasználva a PPP.

Nők Canada Goose Kensington Parka Kék Rendelés

Controlling E. coli Metabolism